不同类型的Ames试验菌株如何选择

引言

Ames试验，是经典的测试化学物或药物致突变实验，该法测定主要在培养皿中进行，具有简单、快速、精确而又灵敏的特点，被世界各国广泛采用。该试验是以营养缺陷型的突变体菌株为指示生物检测基因突变的体外试验，常用的菌株有组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌或色氨酸缺陷型大肠杆菌。本文从药物毒性筛选评价的角度，简单阐述不同类型Ames试验菌株的选择。

Ames试验类型 

随着分子生物学领域的快速发展， Ames作为一项经典的致突变性筛选方法也在不断发展和完善，譬如微孔板法（Mini-Ames或Micro-Ames试验）、液态培养法（Ames II试验）等。近两年，针对N-亚硝胺杂质潜在致突变性评估，FDA/国家毒理学研究中心（US FDA/NCTR）、欧洲药品管理局（EMA）推荐使用增强Ames测试（Enhanced Ames Test）。

 

Ames试验菌株

在药物毒性评价筛选试验中，不同类型的Ames试验，因为杂质使用量不同，试验菌株的种类有所不同，详见下表：

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※菌株

齐氏生物提供的沙门氏菌株（TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537）和大肠杆菌WP2uvrA, 经过鉴定，菌株特性与活菌数量符合Ames试验国家标准，并以甘油菌的形式提供，融化后可直接使用。 为了保证试验效果，建议搭配齐氏生物研发的S9代谢活化系统一起使用。

※ 试剂盒 

 

 ※ 活化系统

CHI Scientific（齐氏生物）研发的S9代谢活化系统是经过酶诱导剂处理的肝脏所提取的带有辅助因子和微粒体部分的测试系统。

 

※ 大鼠肝S9

大鼠肝细胞S9是肝实质细胞匀浆液的去线粒体上清液，包含了大量的CYPs等药物代谢酶，对于研究化合物的药物代谢和考察潜在的药物药物相互作用是非常有用的研究工具，同时也是食品、化妆品、化学品等致突变试验(Ames)重要试剂。

 

※ 仓鼠肝S9 
2023年7月28日，EMA(欧洲药品管理局)发布指南，其中关于N-亚硝胺杂质的增强Ames试验条件中，对于S9种类和浓度的描述明确指出:应在没S9及存在30%大鼠肝脏S9和(或)30%仓鼠肝脏S9的情况下进行Ames测定。大鼠和仓鼠S9应从经细胞色素P450酶诱导性物质处理的啮齿动物中制备。由此可见，诱导仓鼠肝S9是申报OECD，增强型Ames试验中的重要试剂。