大鼠卵巢颗粒细胞原代培养

主要功能为产生性激素，并且与相关的生长因子相互作用促进卵母细胞的发育。齐氏生物科技提供的大鼠卵巢颗粒细胞，采用胶原酶消化制备而来。
1：雌性SD大鼠，每只皮下注射孕马血清促性腺激素（PMSG）40IU，48h后颈椎脱臼法处死。
2：酒精消毒，在无菌条件下迅速剖取卵巢放入预冷的无菌PBS中，去除卵巢周围组织及表面包膜，PBS清洗后置于预冷的DMEM/F12培养基中。
3：在解剖显微镜下用25号针头刺破卵泡，使颗粒细胞释放入DMEM/F12培养基，离心管内吹打分散成单个悬浮细胞。
4：加入0.25％胰蛋白酶与0.02％乙二胺四乙酸(EDTA)混合消化液，于37℃水浴中消化60min。期间从水浴锅中取出，用吸管反复吹打悬液2～3次。
5：加入含有胎牛血清的培养液终止消化，200目不锈钢细胞筛过滤。1000r/min离心5min，洗涤滤液，弃上清收集细胞。
6：DMEM/F12培养基(含15％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素)重悬细胞，将沉淀制成单细胞悬液。接种于培养瓶中于37℃、5％CO2培养箱中预培养。