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大鼠海马神经元细胞原代培养
869 人阅读发布时间：2014-05-22 15:52
1、组织源：1周龄大鼠乳鼠
2、性别：雌雄不限
3、消毒方法：PBS清洗5次
4、培养用液
基础培养基：DMEM（低糖）
添加因子：EGF；Dex;InsulinSelenium；Glutamine；Penicillin；Streptomycin；FBS
5、消化用液
成分：0.05%Collagenase-2(2%),0.1%Collagenase-1(2%)
时间：15min
温度：37℃
6、培养基本操作方法
（1）小鼠表面喷70%酒精消毒，无菌解剖，取出海马组织；
（2）无菌PBS清洗3次，用含双抗的无菌PBS清洗2次；
（3）加入3ml酶消化液，用吸管吹打散组织，37℃消化15min；
（4）充分吹打细胞消化液，使细胞尽量脱落；
（5）终止消化后，过200目筛网，1000rpm离心5min，弃上清液，加无菌PBS清洗并离心两次；
（6）弃上清，往沉淀中加5ml完全培养基，重悬细胞后接种至25方瓶，37℃、5%CO2培养箱中培养观察。