小鼠软骨细胞原代培养

大鼠软骨细胞分离自正常大鼠软骨组织，软骨细胞主要功能：（1）软骨是人身体中唯一不会发生癌变的组织。（2）骨骼在发育初期大部分是由软骨构成的。（3）软骨一般起到承重负荷，减少关节间骨骼摩擦等作用。齐氏生物科技提供的大鼠关节软骨细胞，均来自新鲜组织。
1.    组织源：4-6周龄小鼠
2.    性别：雄
3.    消毒方法：75%酒精，无菌含双抗PBS
4.    培养用液
      基础培养基：DMEM(LowGlucose)
      添加因子：10%FBS;Penicillin100ug/ml;Streptomycin100U/ml.
5.    消化用液
      CollagenaseII&Trypsin
6.    培养基本操作方法
a.    将小鼠麻醉，75%的酒精消毒表面，并在无菌条件下分离大腿腿骨，尽可能去除筋膜、肌肉和结缔组织；
b.    将从关节处分离出软骨组织，将其剪成小于1mm3的组织块，用含双抗的冷PBS液反复吹打清洗2-3次，静置5min后，弃去上层液体及漂浮组织，将剩余          组织移入2ml离心管中；
c.    往离心管中加3倍体积的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化15-20min；
d.    4℃静置5min；弃上清，加入0.2%胶原酶II，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化30～60min；
e.    加入生长培养基终止消化，反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液,1200rpm 离心8min，弃上清，用DMEM完全培养基重新悬浮细胞, 放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。
f.    培养2天后换液，以后每隔2-3天换1次液。在倒置显微镜下观察细胞形态与生长情况。