鸡小肠上皮细胞原代培养

1.  组织源：  XXXX周龄（或月龄）小鸡 或成鸡
2.  性别：
3.  消毒方法：
4.  等待时间：  （组织脱离组织源后到酶解开始的等待时间）
5.  培养用液
     基础培养基：DMEM (High-glucose)
     添加因子：10% FBS; Insulin 5ug/ml; Human EGF 25ng/ml; Penicillin 100ug/ml; Streptomycin 100U/ml.
6.  消化用液
     成分： 0.1% Collagenase-2(2%), 0.1% Dispase (100mg/ml, 10%)
     时间：
     温度：
7.  培养基本操作方法
     a.   小鸡用温水清洗，表面喷70%酒精消毒，无菌解剖，取肠组织；
     b.   无菌PBS清洗6-8次，将肠内表面外翻，酒精浸泡5-10min；
     c.   无菌PBS清洗3次，用含双抗的无菌PBS清洗2次；
     d.   手术线系住两端，加入10ml酶消化液（0.1% Col-2, 0.1% dispase）,37°消化1.5小时；
     e.   充分吹打细胞消化液，使肠内表面组织、细胞尽量脱落；
     f.   取出鸡肠组织，1000rpm离心5min，弃上清液，加无菌PBS清洗并离心两次；
     g.   弃上清，往沉淀中加2ml完全培养基，重悬细胞后接种至6孔板，37°5%CO2培养箱中培养观察。
8.  提供4-6张有代表性的照片 （以jpg形式电子版并同时粘贴到这个文档）
9.  鉴定方法： （如果有鉴定请列举所用方法和抗体）
10. 参考文献 （列举3-4篇查阅的文章）