小鼠小肠平滑肌细胞

平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式。肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生，这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性。利用肠平滑肌细胞的培养，可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。

1．材料和试剂：18日龄ICR鼠，DMEM培养基，FBS，insulin, EGF, Dex，双抗等。
2．试剂的配制：
（1） 基础培养基：DMEM+2% FBS+双抗
（2） 完全培养基：基础培养基含EGF 、insulin
3. 操作步骤：
（1）麻醉18日龄实验小鼠，无菌取小鼠小肠组织于预先加有10ml PBS（2x双抗）的30mm dish中。
（2）用眼科剪和眼科镊小心去除肠系膜，纵向剪开肠道并加入10ml PBS清洗2次，然后将组织剪碎成1mm3的小块并转移至50ml离心管中。
（3）加入无血清的DMEM培养液并用移液管反复吹打，小心除去上清。重复该步骤4-5次，直至上清液澄清。
（4）无菌条件下按1:5 (W/V) 加入0.2% 的collagenase I（3ml），37℃震荡消化20min；之后稀释酶浓度至0.1%，继续震荡消化45min, 232/min。
（5）消化结束后，使用巴氏吸管/移液管反复吹打消化物150次，室温静置1min，小心吸取上清，留部分液体在底部，重复该步骤2次。
（6）在上清中加入10ml含2% FBS的基础培养基，混匀，200-300rpm离心2min，小心移除上清，之后加入10 ml含2% FBS的基础培养基重悬沉淀。
（7）重复步骤6 过程5-6次，直至上清澄清，组织颗粒明显，最后将沉淀转移至含生长因子的完全培养基中进行培养。
（8）静置培养24-48h后换液，去除未贴壁的组织颗粒。
（9）每日观察细胞状态，待上皮细胞融合至70%时，使用胰酶消化细胞并传代。