鸡小肠上皮细胞原代培养

1、组织源：XXXX周龄（或月龄）小鸡或成鸡
2、等待时间：（组织脱离组织源后到酶解开始的等待时间）
3、培养用液
      基础培养基：DMEM(High-glucose)
       添加因子：10%FBS;Insulin5ug/ml;HumanEGF25ng/ml;Penicillin100ug/ml;Streptomycin 100U/ml.
4、消化用液
      成分：0.1%Collagenase-2(2%),0.1% Dispase(100mg/ml,10%)
5、培养基本操作方法

1. 小鸡用温水清洗，表面喷70%酒精消毒，无菌解剖，取肠组织；
2. 无菌PBS清洗6-8次，将肠内表面外翻，酒精浸泡5-10min；
3. 无菌PBS清洗3次，用含双抗的无菌PBS清洗2次；
4. 手术线系住两端，加入10ml酶消化液（0.1%Col-2,0.1%dispase）,37°消化1.5小时；
5. 充分吹打细胞消化液，使肠内表面组织、细胞尽量脱落；
6. 取出鸡肠组织，1000rpm离心5min，弃上清液，加无菌PBS清洗并离心两次；
7. 弃上清，往沉淀中加2ml完全培养基，重悬细胞后接种至6孔板，37°5%CO2培养箱中培养观察。