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人前脂肪细胞
608 人阅读发布时间：2014-06-12 10:36
实验材料：培养基A（DMEM/F12+10%FBS）;培养基B（DMEM/F12，5ug/ml牛胰岛素，50ug/ml转铁蛋白，50ng/ml氢化可的松）;消化液：0.1%胰酶，0.2%一型胶原酶。
前脂肪细胞的分离及诱导：
- 取人脂肪组织约3g，用PBS缓冲液冲洗3次，除去脂肪组织中可见的结缔组织和血管
- 把脂肪组织尽量剪碎，再用PBS缓冲液冲洗3次
- 加入事先配好的消化液5ml，在37℃恒温摇床消化大约50min
- 当消化液呈乳浊状，脂肪组织完全消化完后，加入培养基A终止消化，并吹打均匀
- 用80目滤网过滤，1500rpm离心5min，弃上清
- 向沉淀加入4ml培养基A并重悬，接种进25方瓶于37℃，5％CO2培养箱中培养
- 第三天第一次换液，待细胞占据瓶底70%左右，换培养基B进行诱导