大鼠嗅球成鞘细胞分离培养方法

1.材料与方法
1.1实验动物及试剂
出生7~9d大鼠幼仔、手术器械、DMEM培养基和胎牛血清FBS、0.125%胰蛋白酶、、PBS等
包被：Poly-L-Lysine多聚赖氨酸，储存液浓度为4mg/ml，超纯水稀释（1:300）。使用时浓度为13.3ug/ml。24孔板每孔加50ul室温孵育1h后吸去，超纯水清洗后吹干。
1.2实验方法
1.2.1 脱颈处死大鼠幼仔，固定在手术板上，用75%乙醇喷洒头部皮肤消毒
1.2.2 剪去头部皮肤，然后作环形切口，除去颅盖，在鼻尖处显露脑和两个嗅球
1.2.3 从脑部轻轻取下嗅球，用PBS清洗2~3遍，除去血块和毛细血管等
1.2.4 剪碎组织块,用浓度为0. 125 %的胰蛋白酶37 ℃水浴消化15-20 min 
1.2.5终止消化后轻轻吹打嗅球组织，过滤后离心(1000 r/ min ,5 min) 去除上清液,重复1~2次
1.2.6 重悬细胞沉淀，接种到多聚赖氨酸包被过的24孔板种，一只幼仔可接1~2孔，每天换液并观察培养结果