小鼠胃粘膜上皮细胞培养

1培养液：DMEM/F12，10%胎牛血清，100 U/ml 青链霉素
2材料
ICR乳鼠，饭盒、眼科直剪、眼科直镊、眼科弯镊、玻璃培养皿、酒精棉球、15 ml和 50 ml 的离心管，磁力搅拌器和搅拌子(或者水浴振荡器)、100目不锈钢筛网。
3 方法
3.1 将胰酶和I型胶原酶用PBS液配成 0. 1%的浓度的混合溶液，并放置于4℃。
3.2 解剖取材：将2-3只小鼠放入75%酒精中浸泡约5分钟，然后取出小鼠固定在解剖板上，再用酒精棉球擦拭小鼠腹部，然后一层层剖开，露出内脏组织，用剪刀剪下胃组织，放入冰浴的 PBS液中。重复以上过程。取材完毕后，撤掉取材的手术器械。
3.3 用第二套手术器械进行下列操作。用眼科直镊和眼科弯镊把胃周边的血凝块及纤维组织剔除掉，放在一个预先装好PBS液的培养皿中洗一遍后，将胃组织放在另外一个培养皿中，用眼科直剪将胃组织剖开，漏出内表面，然后洗掉里面的残留东西，再加入适量的酶液，转入15ml离心管中，放在 37℃水浴中消化约10min，然后用玻璃滴管吹打消化液，镜检，可看见不少透亮的细胞团和一些单个细胞，加入少量完全培养基终止消化。
3.4 消化液终止消化后过100目不锈钢筛网，收集滤液，1500rpm离心5min，沉淀用适量培养基重悬，用培养液调整细胞浓度为5x105个/ml，接种到25cm2培养瓶中，放入培养箱培养。
3.5 上皮细胞刚接种时形状为圆形，大约在 24 h左右基本贴壁，此时细胞形态为鹅卵石样。