大鼠皮肤成纤维细胞

细胞描述
成纤维细胞是皮肤的主要细胞成分，具有合成和分泌三种纤维以及基质的功能。在间质的更新和创伤修复过程中，具有十分重要的作用。真皮成纤维细胞主要分布于黏膜和皮下疏松结缔组织，胞质内富含嗜碱性颗粒。
试剂和材料
乳鼠 、Collagenase-3，Trypsin、血清、DMEM/F12基础培养基
实验步骤
1、将乳鼠放入75%酒精中浸泡约5min，取出皮肤，将皮肤组织剪成1mm3大小的组织块。
2、加入0.2%的胰酶和胶原酶III的混合酶液，37℃消化约40min；
3、过200目筛网，收集滤液,1500rpm离心5min,沉淀用适量培养基重悬，接种到25cm2培养瓶中，放入培养箱培养。
细胞传代及冻存
1、细胞生长至对数期，细胞达到80-90％融合。
2、移除细胞培养基，PBS清洗细胞2次。
3、加入0.25%胰酶，37℃消化，镜下观察细胞回缩变圆，完全培养基终止消化。
4、离心，重悬细胞后重新接种于新鲜培养基中。
5、细胞不可冻存。