人主动脉内皮细胞

血管内皮细胞作为血管内膜的主要结构，在创伤修复、血管生成、止血、血栓形成、出血性疾病、动脉粥样硬化等一系列生理和病理过程中发挥重要作用。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成,呈多边形，细胞的边缘呈锯齿状，相互嵌合。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最小的微血管。 血管内皮细胞（EC）位于血液与血管组织之间，它不仅能完成血液和组织液的代谢交换，并且能合成和分泌多种生物活性物质，以保证血管正常的收缩和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，进而保持血液的正常流动和血管的长期通畅。抗凝血材料表面内皮细胞化，可以减少血栓的形成和血小板激活。
试剂和材料
人主动脉组织 、Collagenase-2、血清、M199基础培养基
实验步骤
1、将人主动脉组织用无菌PBS清洗4-5次；
2、去除主动脉组织表面的脂肪和结缔组织，L-DMEM培养基清洗2次，15ml离心管中加入10ml胶原酶消化液，37℃消化
30min，消化期间每10min轻轻充分吹打细胞消化液；
3、用细胞刮分离血管内皮细胞，然后用200目细胞筛滤去大块组织，之后1500rpm离心5min；
4、弃上清，沉淀细胞加6ml完全培养液重悬，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
5、培养24h后换液，以后每隔2-3天换1次液。在倒置显微镜下观察细胞形态与生长情况。
细胞传代及冻存
1、细胞生长至对数期，细胞达到80-90％融合。
2、移除细胞培养基，PBS清洗细胞2次。
3、加入0.25%胰酶，37℃消化，镜下观察细胞回缩变圆，完全培养基终止消化。
4、离心，重悬细胞后重新接种于新鲜培养基中。