小鼠涎腺细胞原代培养方法

1. 组织源：6-8周龄C57小鼠
2. 性别：雌雄不限
3. 培养用液：
基础培养基：M199；
添加因子：FBS; Penicillin; Streptomycin; EGF
4. 消化用液
成分：Collagenase-Ⅱ,透明质酸酶
时间：20min
温度：37℃
5. 培养基本操作方法
a. 常规麻醉消毒，无菌解剖，取颌下腺，PBS液冲洗去血液；
b. 无菌PBS清洗3次，用含双抗的无菌PBS清洗2次；
c. 将漂洗后的组织至于平皿中,剥去包膜，剪碎后转移至5ml离心管；
d. 加入消化液，置于37℃恒温培养箱中消化60min；
e. 终止消化后，过200目筛网，1000rpm离心8min，弃上清液，加无菌PBS清洗并离心两次；
f. 弃上清，往沉淀中加5ml完全培养基，重悬细胞后接种至T25方瓶，37℃、5% CO2培养箱中培养观察。