SD大鼠胰岛细胞原代培养

1.组织源：200-250g 成年SD大鼠
2.性别：雌/雄性
3.消毒方法：75%酒精消毒， PBS
4.培养用液
基础培养液：RPMI-1640
添加因子： FBS, Penicillin, Streptomycin等。
5.消化方式：
成分：0.1% Collagenase-4，0.1%胰酶
时间：10min
温度：37℃
6.细胞原代分离、培养基本操作步骤：
（1）SD大鼠经腹腔麻醉后，75%酒精进行全身消毒，打开腹腔暴露出胆管及胰管，1号线结扎靠近肠壁处胰管，经胆管逆行注入10ml预冷的酶液，使胰腺膨胀，然后迅速摘取整个胰腺。
（2）胰腺放入10ml PBS中，37℃条件下孵育10min，然后将其取出置于冰浴中撕碎，移入消化瓶中震荡1min使其呈细沙状，加入5ml FBS和15ml冷PBS终止消化。
（3）60目细胞筛过滤胰腺组织后，细胞悬液1000rpm离心3min，沉淀用冷PBS重悬，再次1000rpm离心3min。
（4）细胞沉淀用25%的Ficoll 400液4ml混匀，其上依次加入23%，20%，11% Ficoll 400液和PBS各2ml，3000rpm离心20min。
（5）吸出分层后的胰岛细胞，最后用PBS洗涤2次后接种于25cm2培养瓶中进行培养。