大鼠主动脉内皮细胞原代培养

1.组织源：150-200g大鼠主动脉
2.性别：雌/雄性
3.消毒方法：75%酒精消毒， PBS
4.培养用液
基础培养液:血管内皮细胞专用培养基
添加因子:FBS, Heparin, Endothelial Cell Growth Supplement, Penicillin, Streptomycin等。
5.消化方式：
成分：0.1% Collagenase-2，0.1%胰酶
时间：20min
温度：37℃
6.细胞原代分离、培养基本操作步骤：
a.腹腔注射麻醉处死大鼠，腹部喷75%酒精消毒，无菌条件下取出胸部主动脉组织；
b.去除主动脉组织表面的脂肪和结缔组织，HBSS清洗2次，解剖显微镜下倒置主动脉，15ml离心管中加入3ml胶原酶消化液，37℃消化20min，消化期间每10min轻轻充分吹打细胞消化液，使细胞尽量脱落；
c.用200目细胞筛滤去未消化部分组织，之后1500rpm离心5min；弃上清，沉淀细胞加3ml完全培养液重悬，
d.然后，用0.1%胰酶消化组织20min，消化期间每10min轻轻充分吹打细胞消化液，使细胞尽量脱落；
e.用200目细胞筛滤去未消化部分组织，之后1500rpm离心5min；弃上清，沉淀细胞加3ml完全培养液重悬
f.将c和e步骤重悬培养液混匀后接种于25cm2培养瓶中，37℃、5%CO2培养箱中培养2h；最后，轻轻吸出瓶中培养基，之后往瓶中加入5ml新鲜完全培养基继续培养。