大鼠骨髓干细胞

1.1实验材料
SPF级SD大鼠7周龄(购于扬州大学实验动物比较医学中心)， M199基础培养基（GIBCO公司cat: 31100-035，lot: 1369413），FBS胎牛血清（GIBCO公司cat: 16400-044），双抗（北京夏斯生物科技有限公司prospec cat: SV30010），解剖剪、手术镊（江阴泰诺商贸有限公司），低速离心机（上海贝恩生物科技有限公司cat: TDZ4B-WS），CO2培养箱（上海博讯cat: BC-J160S）。超净工作台（上海博讯型号SW-CJ-2FD）。
1.2 实验方法
a.大鼠腹腔注射0.5ml 3%的麻醉致死 ，浸入盛有体积分数75%乙醇的烧怀中消毒15min后移出；
b.无菌条件下取出股骨、胫骨，去除干净附着于骨表面的肌肉。
c.将获取的骨头浸入盛有磷酸盐缓冲液PBS的小烧怀中，用剪刀剪去骨头两端的干骺端，暴露出骨髓腔。
d.取一支10ml一次性注射器抽取6~8ml的M199不完全培养液冲洗骨髓腔数次，至骨头发白透亮，收集细胞悬液。
e.将离心管配平后放于离心机中，离心半径12cm，1500r/min，离心5min；
f.吸弃上清液，取10ml PBS缓冲液，吹打均匀，离心，离心半径12cm，1500r/min，离心5min。
g.吸弃上清液，加入5ml M199完全培养基，将细胞沉淀吹打均匀，接种于T25细胞培养瓶中，放入CO2培养箱培养。